ইউনিভার্সাল সিকোয়েন্সিং টেল-সিক টার্গেট সমৃদ্ধকরণ

স্পেসিফিকেশন:

• পণ্যের নাম: TELL-SeqTM টার্গেট সমৃদ্ধি
• এর জন্য: গবেষণা শুধুমাত্র ব্যবহার করুন, ডায়াগনস্টিক পদ্ধতির জন্য নয়
• প্রস্তুতকারক: ইউনিভার্সাল সিকোয়েন্সিং টেকনোলজি কর্পোরেশন
• প্রয়োজনীয় জিনোমিক ডিএনএ: 5ng
• স্টোরেজ শর্ত: Tris বাফার pH 7.5-8.0 বা কম TE বাফার

পণ্য ব্যবহারের নির্দেশাবলী

জিনোমিক ডিএনএ ইনপুট সুপারিশ:
প্রোটোকলের জন্য আপনার কমপক্ষে 5ng জিনোমিক ডিএনএ রয়েছে তা নিশ্চিত করুন। সফল সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য উচ্চ আণবিক ওজন ডিএনএ অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। কিউবিট ডিএসডিএনএ বিআর অ্যাসে কিট বা এইচএস কিট-এর মতো ফ্লুরোমেট্রিক-ভিত্তিক পদ্ধতি ব্যবহার করে ডিএনএ পরিমাপ করুন। পরিমাপের আগে ট্রিস বাফারে ঘনীভূত ডিএনএকে কার্যকরী ঘনত্বে (0.4ng/l থেকে 1ng/l) পাতলা করুন। পিএইচ 7.5-8.0 বা কম টিই বাফার সহ ট্রিস বাফারে জিনোমিক ডিএনএ সংরক্ষণ করুন।

কিট বিষয়বস্তু:

TELL-SeqTM লাইব্রেরি প্রিপ কিট, স্ট্যান্ডার্ড সাইজ দুটি নিয়ে গঠিত বাক্স:

• বক্স 1: বারকোডিং এনজাইম, এক্সোনুক্লিজ এবং আরও অনেক কিছু সহ বিভিন্ন রিএজেন্ট রয়েছে।
• বক্স 2: টেল বিড প্লেক্সব, ওয়াশ সলিউশন এবং স্টপ সলিউশন রয়েছে।

দ্রষ্টব্য: বক্স 1 রিএজেন্ট 6 বারের বেশি হিমায়িত করবেন না এবং গলাবেন না।

FAQ:

1. প্রশ্ন: আমি কি ফ্লুরোমেট্রিক-ভিত্তিক পদ্ধতিগুলি ছাড়া অন্য পদ্ধতিগুলি ব্যবহার করতে পারি? ডিএনএ পরিমাপ করা?
   উত্তর: সঠিক পরিমাপের জন্য কিউবিট ডিএসডিএনএ বিআর অ্যাসে কিট বা এইচএস কিট-এর মতো ফ্লুরোমেট্রিক-ভিত্তিক পদ্ধতি ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়। এমন পদ্ধতিগুলি এড়িয়ে চলুন যা শুধুমাত্র মোট নিউক্লিক অ্যাসিড ঘনত্ব পরিমাপ করে।
2. প্রশ্ন: সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য আমার জিনোমিক ডিএনএ কীভাবে সংরক্ষণ করা উচিত?
   উত্তর: সেরা ফলাফলের জন্য জিনোমিক ডিএনএ 7.5 - 8.0 এর pH বা কম TE বাফার (10mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0) সহ একটি Tris বাফারে সংরক্ষণ করা উচিত।

শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য। ডায়াগনস্টিক পদ্ধতিতে ব্যবহারের জন্য নয়।
নথি # 100032-USG v4.0
আগস্ট 2024
এই নথিটি ইউনিভার্সাল সিকোয়েন্সিং টেকনোলজি কর্পোরেশনের মালিকানাধীন এবং এটি শুধুমাত্র এখানে বর্ণিত পণ্যগুলির ব্যবহারের সাথে তার গ্রাহকের ব্যবহারের জন্য এবং অন্য কোন উদ্দেশ্যে নয়। TELL-Seq™ কিটের সঠিক এবং নিরাপদ ব্যবহার নিশ্চিত করতে এই নথির নির্দেশাবলী যথাযথভাবে প্রশিক্ষিত কর্মীদের দ্বারা যথাযথভাবে অনুসরণ করতে হবে।
ইউনিভার্সাল সিকোয়েন্সিং টেকনোলজি কর্পোরেশন TELL-SEQ™ কিটের ভুল ব্যবহারের পরে ঘটে যাওয়া কোনো দায় স্বীকার করে না।
©2023 ইউনিভার্সাল সিকোয়েন্সিং টেকনোলজি কর্পোরেশন। সর্বস্বত্ব সংরক্ষিত TELL-Seq™ হল ইউনিভার্সাল সিকোয়েন্সিং টেকনোলজি কর্পোরেশনের ট্রেডমার্ক। অন্য সব নাম, লোগো এবং অন্যান্য ট্রেডমার্ক তাদের নিজ নিজ মালিকদের সম্পত্তি।

পুনর্বিবেচনার ইতিহাস

ডক #100032-USG v1.0	নভেম্বর 2021	প্রাথমিক রিলিজ
ডক #100032-USG v2.0	আগস্ট 2022	সাসপেনশন বাফার ইজেড এবং টেল বিড প্লেক্স বিকল্পের সাথে আপডেট হওয়া TELL- Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিট V1 এর সাথে কাজ করার জন্য প্রোটোকল আপডেট
ডক # 100032-USG v3.0	আগস্ট 2023	TELL Bead অপশন সরানো হয়েছে। শুধুমাত্র TELL Bead Plex ব্যবহার করা হয় সামনের দিকে। উচ্চ আণবিক ওজন ডিএনএ বৈশিষ্ট্য সংরক্ষণের জন্য বারকোডিং প্রক্রিয়ার সময় সঠিক নল ঘূর্ণনের একটি গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপের জন্য প্রস্তাবিত মিক্সিং সিস্টেমের সাথে একটি নোট এবং একটি ছবি যোগ করা হয়েছে।
ডক # 100032-USG v4.0	আগস্ট 2024	সাধারণ লক্ষ্য সমৃদ্ধকরণের জন্য ব্যবহারকারীর নির্দেশিকা পরিবর্তিত হয়েছে। অন্যান্য টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেমের সাথে TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রস্তুতি ব্যবহার করার বিষয়ে অতিরিক্ত তথ্য যোগ করা হয়েছে

ভূমিকা

এই প্রোটোকল ব্যাখ্যা করে কিভাবে TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিট এবং Agilent® SureSelect টার্গেট এনরিচমেন্ট সিস্টেমের সংমিশ্রণ ব্যবহার করে হাইব্রিডাইজেশন ক্যাপচারের মাধ্যমে টার্গেট সমৃদ্ধ ইনডেক্সড পেয়ারড-এন্ড TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রস্তুত করা যায়। TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিট সিস্টেম আইডিটি এবং টুইস্ট বায়োসায়েন্সের মতো অন্যান্য টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেমের সাথেও সামঞ্জস্যপূর্ণ।
TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিটটি একটি উদ্ভাবনী ট্রান্সপোসেজ এনজাইম লিঙ্কড লং-রিড সিকোয়েন্সিং (TELL-Seq™) প্রযুক্তি ব্যবহার করে † একটি ইলুমিনা® সিকোয়েন্সিং সিস্টেম থেকে বারকোড লিঙ্কযুক্ত রিড তৈরি করতে একটি পেয়ারড-এন্ড লাইব্রেরি প্রস্তুত করতে৷ Agilent® SureSelect টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেম অত্যন্ত নির্দিষ্ট ক্যাপচার প্রোব ব্যবহার করে লক্ষ্যবস্তু অঞ্চলের সমৃদ্ধকরণের অনুমতি দেয়। প্রতিটি টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেমে প্রোবের একটি অনন্য প্যানেল রয়েছে যা নির্দিষ্ট অঞ্চলগুলিকে ক্যাপচার করার অনুমতি দেয় যা TELL-Seq™ লাইব্রেরির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।

জিনোমিক ডিএনএ ইনপুট সুপারিশ
এই প্রোটোকলের জন্য 5ng জিনোমিক ডিএনএ প্রয়োজন। উচ্চ আণবিক ওজন (HMW) DNA সফল TELL-Seq™ সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য গুরুত্বপূর্ণ।

• মানুষের জিনোমের জন্য, সর্বনিম্ন sampডিএনএ আকার 40Kb এর চেয়ে বেশি হওয়া উচিত।
•  100Kb থেকে 300Kb পর্যন্ত HMW DNA হল সর্বোত্তম মানব পর্যায়ক্রমিক প্রয়োগের জন্য সর্বোত্তম উপাদান।
• পরিচালনার সময় এইচএমডাব্লু ডিএনএ ভাঙা এড়িয়ে চলুন। কম আণবিক ওজন ডিএনএ সরান (একটি জেলে 10Kb এর কম স্মিয়ার হিসাবে চিহ্নিত) s মধ্যেample যদি তারা DNA s-এ একটি উল্লেখযোগ্য অংশ উপস্থাপন করেampলে

ইনপুট ডিএনএ পরিমাপ করতে একটি ফ্লুরোমেট্রিক-ভিত্তিক পদ্ধতি ব্যবহার করুন। আপনি যদি কিউবিট ডিএসডিএনএ বিআর অ্যাসে কিট বা এইচএস কিট ব্যবহার করেন তবে প্রতিটি ডিএনএ এর কমপক্ষে 2 μL ব্যবহার করুন।ampএকটি পরিমাপের জন্য le. যে পদ্ধতিগুলি শুধুমাত্র মোট নিউক্লিক অ্যাসিড ঘনত্ব পরিমাপ করে, যেমন NanoDrop বা অন্যান্য UV শোষণ পদ্ধতিগুলি এড়িয়ে চলুন। HMW DNA ঘনত্বের সঠিক পরিমাপের জন্য, ঘনত্ব পরিমাপ এবং লাইব্রেরি প্রস্তুতির কয়েক ঘন্টা আগে একটি Tris বাফারে (pH 0.4-1) কাজের ঘনত্বে (7.5ng/µl থেকে 8.0ng/µl) ঘনীভূত ডিএনএ পাতলা করুন। জিনোমিক ডিএনএ 7.5 - 8.0 পিএইচ সহ একটি ট্রিস বাফারে সংরক্ষণ করা উচিত বা একটি কম TE বাফার (10 মিমি ট্রিস-এইচসিএল, 0.1 মিমি ইডিটিএ, পিএইচ 8.0)। ডিএনএ এর বিশুদ্ধতা মূল্যায়নের জন্যample, 260 nm এ শোষণ পরিমাপের অনুপাত 280 nm এ শোষণ ব্যবহার করা যেতে পারে। এই প্রোটোকলটি 1.8-2.0 এর শোষণ অনুপাত মান সহ ডিএনএর জন্য অপ্টিমাইজ করা হয়েছে। ডিএনএতে অতিরিক্ত আরএনএ থাকলে এসample, এটি একটি RNase চিকিত্সার সঙ্গে অপসারণ করা উচিত.

কিট সামগ্রী

TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিট, স্ট্যান্ডার্ড সাইজ (2 বক্স)

1 এর মধ্যে বক্স 2: TELL-Seq™ লাইব্রেরি রিএজেন্ট বক্স 1 V1 (PN 100035)

দ্রষ্টব্য: বক্স 1 রিএজেন্টকে 6 বারের বেশি জমাট বা গলাবেন না।

a 10× প্রাইমার II এর সাথে TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার কিট লাইব্রেরির জন্য একসাথে ব্যবহারের জন্য ampবন্ধন

বক্স 2 এর মধ্যে 2: TELL-Seq™ লাইব্রেরি রিএজেন্ট বক্স 2 V1 (PN 100036)

উপাদানের নাম	ক্যাপ কালার	আয়তন (mL)	স্টোরেজ তাপমাত্রা
বিড প্লেক্সকে বলুনb	ক্যাপ কমলা	76	2°C থেকে 8°C
সমাধান ধোয়া	ক্যাপ হোয়াইট	4500	2°C থেকে 8°C
সমাধান বন্ধ করুনc	ক্যাপ ন্যাচারাল	960	2°C থেকে 25°C

b TELL Bead Plex ইলুমিনা এবং নন-ইলুমিনা সিকোয়েন্সিং সিস্টেম উভয় ক্ষেত্রেই ভাল কাজ করে।
c ব্যবহার করার আগে, যদি স্টপ সলিউশনটি পরিষ্কার না হয় বা সাদা বর্জ্য থাকে, তাহলে টিউবটি 37°C তাপমাত্রায় উষ্ণ করুন। ঘূর্ণি কোনো অবক্ষয় দ্রবীভূত করা. প্রথম ব্যবহারের পর, ভবিষ্যতে ব্যবহারের জন্য পুনরায় সাসপেন্ড করা স্টপ সলিউশন ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন।

সতর্কতা

 TELL-Read পাইপলাইন v1.1 বা তার উপরে TELL-Seq™ লাইব্রেরি থেকে তৈরি সিকোয়েন্সিং ডেটা বিশ্লেষণ করার জন্য TELL Bead Plex-এর সাহায্যে তৈরি করা প্রয়োজন।

TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিট, HT24 (2 বক্স)
1 এর মধ্যে বক্স 2: TELL-Seq™ লাইব্রেরি রিএজেন্ট বক্স 1 V1, HT24 (PN 100037) 

দ্রষ্টব্য: বক্স 1 রিএজেন্টকে 6 বারের বেশি জমাট বা গলাবেন না। 

a 10× প্রাইমার II এর সাথে TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার কিট লাইব্রেরির জন্য একসাথে ব্যবহারের জন্য ampবন্ধন

2 এর মধ্যে বক্স 2: TELL-Seq™ লাইব্রেরি রিএজেন্ট বক্স 2 V1, HT24 (PN 100038)

উপাদানের নাম	ক্যাপ কালার		আয়তন	স্টোরেজ তাপমাত্রা
বিড প্লেক্সকে বলুনb	কমলা		456 মিলি	2°C থেকে 8°C
সমাধান ধোয়া		নীল	28.5 মিলি	2°C থেকে 8°C
সমাধান বন্ধ করুনc		সাদা	5.76 মিলি	2°C থেকে 25°C

b TELL Bead Plex ইলুমিনা এবং নন-ইলুমিনা সিকোয়েন্সিং সিস্টেম উভয় ক্ষেত্রেই ভাল কাজ করে।
c ব্যবহার করার আগে, যদি স্টপ সলিউশন পরিষ্কার না হয় বা সাদা প্রিসিপিটেট থাকে, তাহলে টিউবটিকে 37 ºC তাপমাত্রায় গরম করুন। ঘূর্ণি কোনো অবক্ষয় দ্রবীভূত করতে. প্রথম ব্যবহারের পর, ভবিষ্যতে ব্যবহারের জন্য পুনরায় সাসপেন্ড করা স্টপ সলিউশন ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন।

প্রো টিপ: দুটি TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিট, HT24 বক্স 1 এবং বক্স 2 উভয়ই সহ যেকোনো TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার কিটগুলির সাথে যুক্ত হতে পারে।

সতর্কতা 
TELL-Read পাইপলাইন v1.1 বা তার উপরে TELL-Seq™ লাইব্রেরি থেকে তৈরি সিকোয়েন্সিং ডেটা বিশ্লেষণ করার জন্য TELL Bead Plex-এর সাহায্যে তৈরি করা প্রয়োজন।

TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার (1-8) কিট (PN 100003)

PRO টিপ: একটি TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার (1-8) কিটে পর্যাপ্ত প্রাইমার রয়েছে যা চারটি TELL-Seq™ WGS লাইব্রেরি প্রিপ কিটগুলির সাথে ব্যবহার করা যেতে পারে৷

TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার (9-16) কিট (PN 100009)

PRO টিপ: একটি TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার (9-16) কিটটিতে চারটি TELL-Seq™ WGS লাইব্রেরি প্রিপ কিট, স্ট্যান্ডার্ড সাইজের সাথে ব্যবহার করার জন্য যথেষ্ট প্রাইমার রয়েছে৷

TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার (17-24) কিট (PN 100010)

PRO টিপ: একটি TELL-Seq™ লাইব্রেরি মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার (17-24) কিটটিতে চারটি TELL-Seq™ WGS লাইব্রেরি প্রিপ কিট, স্ট্যান্ডার্ড সাইজের সাথে ব্যবহার করার জন্য যথেষ্ট প্রাইমার রয়েছে৷

TELL-Seq™ Illumina® সিকোয়েন্সিং প্রাইমার কিট (PN 100004)

উপাদানের নাম	ক্যাপ কালার	একাগ্রতা	আয়তন (mL)	স্টোরেজ তাপমাত্রা
1 প্রাইমার পড়ুন	কালো	100mM	50	-25°C থেকে -15°C

2 প্রাইমার পড়ুন	সাদা	100mM	50	-25°C থেকে -15°C
সূচক 1 প্রাইমার	লাল	100mM	50	-25°C থেকে -15°C
সূচক 2 প্রাইমার	হলুদ	100mM	50	-25°C থেকে -15°C

TELL-Seq™ টার্গেট ব্লকার (PN 100019)

উপাদানের নাম	ক্যাপ কালার	আয়তন (mL)	স্টোরেজ তাপমাত্রা
TELL-Seq™ টার্গেট ব্লকার	ক্যাপ হোয়াইট	40	-25°C থেকে -15°C

ভোগ্য সামগ্রী এবং সরঞ্জাম (প্রদান করা হয়নি)

ভোগ্য দ্রব্য

ভোগ্য	সরবরাহকারী
0.2 মিলি পিসিআর টিউব বা স্ট্রিপ টিউব	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
20 মিলি পিপেট টিপ (মান এবং প্রশস্ত ছিদ্র)	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
200 মিলি পিপেট টিপ (মান এবং প্রশস্ত ছিদ্র)	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
আণবিক জীববিজ্ঞানের জন্য ইথানল 200 প্রমাণ (পরম) (500 মিলি)	সিগমা-অলড্রিচ, # E7023
Nuclease- মুক্ত জল	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
AMPure XP	বেকম্যান, # A63880
এজিলেন্ট বায়োঅ্যানালাইজার উচ্চ সংবেদনশীলতা ডিএনএ বিশ্লেষণ কিট*	Agilent, # 5067-4626
টেপস্টেশন উচ্চ সংবেদনশীলতা D5000 স্ক্রিনটেপ অ্যাস*	এজিলেন্ট, #5067-5592, #5067-5593
কিউবিট ডিএসডিএনএ এইচএস অ্যাসে কিট	থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, # Q32851 বা Q32854
কিউবিট অ্যাসে টিউব	থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, # Q32856
Dynabeads MyOne Streptavidin T1	থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, # 65601, 65602 বা 65603
Agilent SureSelect XT HS Capture Library Human All Exon 7	Agilent, # G9704N, G9705N বা G9706N
Agilent SureSelect XT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট, ILM Hyb মডিউল (PCR পোস্ট), 16 Rxn	Agilent, #G9916B
TE বাফার, pH 8.0	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী

*ব্যবহারকারী সুবিধায় কোন সিস্টেম উপলব্ধ তার উপর নির্ভর করে।

যন্ত্রপাতি

যন্ত্রপাতি	সরবরাহকারী
থার্মো সাইক্লার	ফলিত বায়োসিস্টেম
0.2 মিলি পিসিআর টিউবের জন্য ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ড	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
টিউব রোটেটর	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
ইনকিউবেটর (35 ডিগ্রি সেলসিয়াসের জন্য)	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
ঘূর্ণি	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
Agilent Bioanalyzer*	চতুর
এজিলেন্ট টেপস্টেশন*	চতুর
Qubit® ফ্লুরোমিটার 3.0	থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, # Q33216, Q33217 বা Q33218
বরফের বালতি	সাধারণ ল্যাব সরবরাহকারী
SpeedVac ভ্যাকুয়াম কনসেনট্রেটর (ঐচ্ছিক)	থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক

*ব্যবহারকারী সুবিধায় কোন সিস্টেম উপলব্ধ তার উপর নির্ভর করে।

TELL-Seq™ হিউম্যান এক্সোম ক্যাপচার ওয়ার্কফ্লো

TELL-Seq™ WGS লাইব্রেরি প্রস্তুতি

প্রোটোকল

TELL-Seq™ WGS লাইব্রেরি প্রস্তুতি
নিম্নলিখিত প্রোটোকলটি মানব ডিএনএ ব্যবহার করে TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রিপ কিট সহ একটি পরিবর্তিত TELL-Seq™ সমগ্র জিনোম সিকোয়েন্সিং লাইব্রেরি প্রস্তুতির পদ্ধতি বর্ণনা করেampলেস বিভিন্ন জিনোমিক DNA sample প্রকারগুলিও একই প্রোটোকল অনুসরণ করে প্রতিস্থাপিত করা যেতে পারে। TELL-Seq™ লাইব্রেরিগুলি অন্যান্য টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেমের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, তবে শিওরসিলেক্ট হিউম্যান অল এক্সন V8 ক্যাপচার প্রোব ব্যবহার করে Agilent SureSelectXT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট সিস্টেম প্রাক্তন হিসাবে ব্যবহৃত হয়ampপ্রোটোকলে লে. অন্যান্য টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেমে ব্যবহারের জন্য অনুগ্রহ করে উপযুক্ত লাইব্রেরি তৈরি করতে TELL-Seq™ লাইব্রেরি প্রস্তুতির (পৃষ্ঠা 10-22) প্রোটোকল অনুসরণ করুন। TELL-Seq™ লাইব্রেরিগুলি নির্দিষ্ট ব্লকার ছাড়াও ব্যবহৃত TELL-Seq™ টার্গেট ব্লকারগুলির সাথে প্রতিটি নির্দিষ্ট টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেমের প্রোটোকল অনুসরণ করে DNA ইনপুট হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।

বারকোড ডিএনএ

ভোগ্য দ্রব্য
➢ ইনপুট জিনোমিক ডিএনএ (ব্যবহারকারী)

জিনোম সাইজ	ইনপুট পরিমাণ	প্রতিক্রিয়া ভলিউম (mL)	প্রস্তুতি/কিট
বড় (মানব)	5 এনজি	150	4

দ্রষ্টব্য: 

1. জিনোমিক ডিএনএকে 7.5 থেকে 8.0 পর্যন্ত পিএইচ সহ একটি ট্রিস বাফারে বা কম TE বাফার (10mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0) এর মধ্যে সংরক্ষণ এবং পাতলা করা উচিত।

➢ 5× রিঅ্যাকশন বাফার (কিট বক্স 1, নীল)
➢ কোফ্যাক্টর II (কিট বক্স 1, অ্যাম্বার)
➢ বারকোডিং এনজাইম (কিট বক্স 1, কালো)
➢ টেল বিড বা টেল বিড প্লেক্স (কিট বক্স 2, কমলা)
➢ সাসপেনশন বাফার EZ (কিট বক্স 1, প্রাকৃতিক)
➢ নিউক্লিজ-মুক্ত জল (ব্যবহারকারী)
➢ 0.2 মিলি পিসিআর টিউব বা স্ট্রিপ টিউব (ব্যবহারকারী)
➢20 µL এবং 200 µL প্রশস্ত ছিদ্র পাইপেট টিপস (ব্যবহারকারী)

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:
   

   আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
   5× প্রতিক্রিয়া বাফার	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত, তারপর   সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। বরফের উপর রাখুন।
   কোফ্যাক্টর II	-25°C থেকে -15°C	ঘূর্ণি মিশ্রিত করা, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ. এ রাখুন অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রা। টিউব বন্ধ করুন   প্রতিটি ব্যবহারের পরে শক্তভাবে ক্যাপ করুন।
   বারকোডিং এনজাইম	-25°C থেকে -15°C	মিশ্রিত করতে টিউবটি 4 থেকে 5 বার ফ্লিক করুন। সেন্ট্রিফিউজ সংক্ষেপে বরফের উপর রাখুন।
   বিড প্লেক্সকে বলুন	2°C থেকে 8°C	সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। বরফের উপর রাখুন। টিউব ক্যাপ বন্ধ করুন  প্রতিটি ব্যবহারের পরে শক্তভাবে কোনো বাষ্পীভবন এড়াতে।
   সাসপেনশন বাফার EZ	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত করা, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ. এ রাখুন ঘরের তাপমাত্রা.
   Nuclease- মুক্ত জল	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।

2. একটি 35 ডিগ্রি সেলসিয়াস ইনকিউবেটরে একটি টিউব রোটেটর সেট আপ করুন (প্রক্রিয়া বিভাগের ধাপ 7 দেখুন)।

সতর্কতা
ডিএনএ ভাঙ্গা এড়াতে উচ্চ আণবিক ওজন জিনোমিক ডিএনএ স্থানান্তর এবং মিশ্রিত করতে প্রশস্ত অরিফিস পিপেট টিপস ব্যবহার করুন। যদি প্রশস্ত ছিদ্রের পিপেটের টিপস পাওয়া না যায়, তাহলে ব্যবহারের আগে একটি পরিষ্কার রেজার ব্লেড দিয়ে একটি স্ট্যান্ডার্ড পিপেটের টিপ টপ থেকে 2mm-3mm কেটে নিন।

পদ্ধতি

1. Vortex TELL Bead Plex অন্তত 30 সেকেন্ডের জন্য জোরালোভাবে। ঢাকনা বা টিউবের পাশে উপস্থিত গুটিকা দ্রবণ নামিয়ে আনতে পালস স্পিন (1 সেকেন্ডের বেশি নয় সেন্ট্রিফিউজ)। ব্যবহারের ঠিক আগে, TELL Bead Plex-কে 200 µL টিপ দিয়ে 5 বার উপরে এবং নিচে দিয়ে নিশ্চিত করুন যে সমস্ত পুঁতি সঠিকভাবে পুনরুদ্ধার করা হয়েছে।
2. একটি 0.2 মিলি পিসিআর টিউবে, প্রতিটি প্রতিক্রিয়া নিম্নলিখিত ক্রমে একত্রিত করুন।
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (mL)
   	বড় জিনোম (150 মিলি)

   5× প্রতিক্রিয়া বাফার	30
   Nuclease- মুক্ত জল কোফ্যাক্টর II	20 – জেড (Z হল DNA ভলিউম)30
   বিড প্লেক্সকে বলুন (0.5M বারকোড/mL)	19

3. 10 বার উপরে এবং নীচে পাইপ দিয়ে ভালভাবে মিশ্রিত করুন বা 5 সেকেন্ডের জন্য জোরালোভাবে ঘূর্ণায়মান করুন এবং দ্রবণটিকে নীচের দিকে আনতে পালস স্পিন করুন। বারকোডিং এনজাইম যোগ করুন।
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (mL)
   	বড় জিনোম
   বারকোডিং এনজাইম	6 মিলি

4. 8 বার উপরে এবং নীচে পাইপ দিয়ে ভালভাবে মেশান। টিউবের দ্রবণের নীচে পাইপেটের ডগা রেখে পাইপেটিং করার সময় বায়ু বুদবুদ প্রবর্তন এড়িয়ে চলুন।
5. একটি প্রশস্ত ছিদ্র পাইপেট টিপ ব্যবহার করুন, নিম্নলিখিত বিকারক যোগ করুন।
   দ্রষ্টব্য: সাসপেনশন বাফার EZ অত্যন্ত সান্দ্র। সঠিক ভলিউম সরবরাহ করা হয়েছে তা নিশ্চিত করতে সাবধানতা এবং ধীরে ধীরে পিপেট ব্যবহার করুন।
6. পাইপেটের ভলিউম 110 μL এ সেট করুন। একটি প্রশস্ত ছিদ্রযুক্ত পিপেটের টিপ ব্যবহার করুন, আস্তে আস্তে 6-8 বার উপরে এবং নীচে পাইপেট করে দ্রবণটি আলতো করে মিশ্রিত করুন। টিউবের দ্রবণের নীচে পাইপেটের ডগা রেখে পাইপেটিং করার সময় অনেকগুলি বায়ু বুদবুদ প্রবর্তন করা এড়িয়ে চলুন।
7. এস বসানampএকটি 35°C ইনকিউবেটরে একটি টিউব রোটেটরে লে টিউব এবং 10 মিনিটের জন্য ধীরে ধীরে (15-30 rpm) ঘোরান।

Sampএকটি 35 ডিগ্রি সেলসিয়াস ইনকিউবেটরে একটি টিউব রোটেটরের উপর লে টিউবগুলি স্থাপন করা হয়।

দ্রষ্টব্য: HMW DNA বৈশিষ্ট্য সংরক্ষণ এবং সঠিক বারকোডিং প্রক্রিয়া সহজতর করার জন্য সঠিক নল ঘূর্ণন গুরুত্বপূর্ণ। প্রস্তাবিত মিশ্রণ সিস্টেম নীচে দেখানো হয়েছে (বাম দিকে)। মিক্সিং সিস্টেম যেগুলি ঘোরে না বা প্রবল কাঁপুনি তৈরি করে সেগুলি HMW DNA বৈশিষ্ট্য এবং TELL-Seq সংরক্ষণের সাথে বেমানান; এই সিস্টেমগুলির মধ্যে কিছু নীচে (ডান দিকে) দেখানো হয়েছে।

ডিএনএ স্থিতিশীল করুন 

ভোগ্য দ্রব্য
➢ স্টেবিলাইজার (কিট বক্স 1, বেগুনি)

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:

আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
স্টেবিলাইজার	-25°C থেকে -15°C	মিশ্রিত করতে টিউবটি 4 থেকে 5 বার ফ্লিক করুন। সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। বরফের উপর রাখুন।

পদ্ধতি

1. এস পুনরুদ্ধারamp35°C ইনকিউবেটর থেকে le টিউব।
2. টিউবে স্টেবিলাইজার যোগ করুন।
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (mL)
   	বড় জিনোম
   স্টেবিলাইজার	3

3. পাইপেটের ভলিউম 110 μL এ সেট করুন। একটি প্রশস্ত ছিদ্রযুক্ত পিপেটের টিপ ব্যবহার করুন, আস্তে আস্তে 6-8 বার উপরে এবং নীচে পাইপেট করে দ্রবণটি আলতো করে মিশ্রিত করুন। অনেক বুদবুদ তৈরি এড়িয়ে চলুন.
4. এস বসানamp35 ডিগ্রি সেলসিয়াস ইনকিউবেটরে টিউব রোটেটরের উপর le টিউব ফিরিয়ে দিন এবং 10 মিনিটের জন্য ধীরে ধীরে (15-30 rpm) ঘোরান।

Tagment DNA 

ভোগ্য দ্রব্য
➢ Tagজিং এনজাইম (কিট বক্স 1, লাল)
➢ Exonuclease (কিট বক্স 1, হলুদ)

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:
   

   আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
   Tagging এনজাইম	-25°C থেকে -15°C	মিশ্রিত করতে টিউবটি 4 থেকে 5 বার ফ্লিক করুন। সেন্ট্রিফিউজ সংক্ষেপে বরফের উপর রাখুন।
   Exonuclease	-25°C থেকে -15°C	মিশ্রিত করতে টিউবটি 4 থেকে 5 বার ফ্লিক করুন। সেন্ট্রিফিউজ সংক্ষেপে বরফের উপর রাখুন।

2. 35 ডিগ্রি সেলসিয়াস ইনকিউবেটরে একই টিউব রোটেটর ব্যবহার করুন।

পদ্ধতি

1. এস পুনরুদ্ধারamp35°C ইনকিউবেটর থেকে le টিউব।
2. যোগ করুন Tagএনজাইম এবং Exonuclease টিউব মধ্যে ging.
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (mL)
   	বড় জিনোম
   Tagging এনজাইম	2
   Exonuclease	3

3. পাইপেটের ভলিউম 110 μL এ সেট করুন। একটি প্রশস্ত ছিদ্রযুক্ত পিপেটের টিপ ব্যবহার করুন, আস্তে আস্তে 8 বার উপরে এবং নীচে পাইপেট করে সমাধানটি আলতো করে মিশ্রিত করুন। এই ধাপের জন্য, মিশ্রণটি খুব পুঙ্খানুপুঙ্খ হতে হবে। অনেক বুদবুদ তৈরি এড়িয়ে চলুন.
4. এস বসানamp35 ডিগ্রি সেলসিয়াস ইনকিউবেটরে টিউব রোটেটরে লে টিউব ফিরিয়ে দিন এবং 10 মিনিটের জন্য ধীরে ধীরে ঘোরান। যখন প্রয়োজন, বিভিন্ন পরিমাণ Tagging এনজাইম লাইব্রেরির আকার সামঞ্জস্য করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।
   দ্রষ্টব্য: যদি একটি দীর্ঘ সন্নিবেশ লাইব্রেরি পছন্দ করা হয়, কম পরিমাণ Tagging এনজাইম বিক্রিয়ায় ব্যবহার করা যেতে পারে। অন্যদিকে, যদি একটি ছোট সন্নিবেশ লাইব্রেরি পছন্দ করা হয়, 6µL পর্যন্ত Tagging এনজাইম বিক্রিয়ায় ব্যবহার করা যেতে পারে।
5. ইনকিউবেশনের পরপরই পরবর্তী ধাপে এগিয়ে যান।

পুঁতি ধোয়া

ভোগ্য দ্রব্য

• স্টপ সলিউশন (কিট বক্স 2, প্রাকৃতিক বা প্রথম ব্যবহারের পরে ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়)
• ধোয়ার সমাধান (কিট বক্স 2, সাদা)
• 0.2 মিলি পিসিআর টিউব বা স্ট্রিপ টিউব (ব্যবহারকারী)

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:
   

   আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
   সমাধান বন্ধ করুন	2°C থেকে 25°C	কোন precipitates জন্য পরীক্ষা করুন. যদি উপস্থিত থাকে, বাফারটি 37 ​​মিনিটের জন্য 10 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ঢেলে দিন, এবং ঘূর্ণি দ্রবীভূত না হওয়া পর্যন্ত। ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন জন্য  ভবিষ্যতে ব্যবহার।
   সমাধান ধোয়া	2°C থেকে 8°C	ঘরের তাপমাত্রায় আনুন।

2. নিম্নলিখিত প্রোগ্রামের সাথে একটি থার্মো সাইক্লার সেট আপ করুন:
   • 100 ডিগ্রি সেলসিয়াসে প্রিহিট ঢাকনা বিকল্প
   • 63°C চিরতরে

পদ্ধতি

1. এস বসানamp1 মিনিটের জন্য বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত একটি চৌম্বকীয় স্ট্যান্ডে লে টিউব।
2. টিউবটি ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে থাকা অবস্থায়, পুঁতিগুলিকে বিরক্ত না করে সুপারনাট্যান্টটিকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন।
3. চুম্বকীয় স্ট্যান্ড থেকে টিউবটি সরান। 120 μL ওয়াশ সলিউশন যোগ করুনampলে টিউব। পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড Pipet. প্রয়োজনে, সমাধানটি নামিয়ে আনতে পালস স্পিন করুন।
4. এস বসানamp1 মিনিটের জন্য বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত চৌম্বকীয় স্ট্যান্ডে লে টিউব ফিরে যান।
5. টিউবটি ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে থাকা অবস্থায়, পুঁতিগুলিকে বিরক্ত না করে সুপারনাট্যান্টটিকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন।
6. ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ড থেকে টিউবটি সরান। টিউবে 80 μL স্টপ সলিউশন যোগ করুন।
7. পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড করার জন্য Pipet বেশ কয়েকবার। প্রয়োজনে, সমাধানটি নামিয়ে আনতে পালস স্পিন করুন।
8. 5 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় টিউবটি ইনকিউবেট করুন।
9. এস বসানamp1 মিনিটের জন্য বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত চৌম্বকীয় স্ট্যান্ডে লে টিউব ফিরে যান।
10. টিউবটি ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে থাকা অবস্থায়, পুঁতিগুলিকে বিরক্ত না করে সুপারনাট্যান্টটিকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন।
11. চুম্বকীয় স্ট্যান্ড থেকে টিউবটি সরান। PCR টিউবে 120 μL ওয়াশ সলিউশন যোগ করুন। পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড Pipet.
12. সমস্ত পুঁতির দ্রবণ একটি নতুন 0.2 মিলি পিসিআর টিউবে স্থানান্তর করুন।
13. 63 মিনিটের জন্য পিসিআর থার্মোসাইক্লারে 3 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে টিউবটি ইনকিউবেট করুন।
14. নতুন এস বসানamp1 মিনিট বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত ঘরের তাপমাত্রায় চৌম্বকীয় স্ট্যান্ডের উপর le টিউব।
15. টিউবটি ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে থাকা অবস্থায়, পুঁতিগুলিকে বিরক্ত না করে সুপারনাট্যান্টটিকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন।
16. চুম্বকীয় স্ট্যান্ড থেকে টিউবটি সরান। PCR টিউবে 120 μL ওয়াশ সলিউশন যোগ করুন। পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড Pipet. প্রয়োজনে, সমাধানটি নামিয়ে আনতে পালস স্পিন করুন।
17. 63 মিনিটের জন্য পিসিআর থার্মোসাইক্লারে 3 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে টিউবটি ইনকিউবেট করুন।
18. এস বসানamp1 মিনিট বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত ঘরের তাপমাত্রায় চৌম্বকীয় স্ট্যান্ডের উপর le টিউব।
19. টিউবটি ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে থাকা অবস্থায়, পুঁতিগুলিকে বিরক্ত না করে সুপারনাট্যান্টটিকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন। একটি P20 পাইপেট ব্যবহার করুন যে কোনো অবশিষ্ট সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন।
20. ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ড থেকে টিউবটি সরান। 20 µL ওয়াশ সলিউশনের মধ্যে পুঁতিগুলি পুনরায় সাসপেন্ড করুন।

উল্লেখ্য
এটি একটি নিরাপদ স্টপিং পয়েন্ট। ধোয়া পুঁতি দুই সপ্তাহের জন্য 2°C থেকে 8°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

Amplify লাইব্রেরি

ভোগ্য দ্রব্য

• 2× পিসিআর মাস্টার মিক্স (কিট বক্স 1, গোলাপী)
• 10× প্রাইমার I (কিট বক্স 1,  সাদা)
• 10× প্রাইমার II, T50# (মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার কিট)
• নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল (ব্যবহারকারী)
• 0.2 মিলি পিসিআর টিউব বা স্ট্রিপ টিউব (ব্যবহারকারী)

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:
   

   আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
   2× পিসিআর মাস্টার মিক্স	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। টিউব 4 থেকে 5 ফ্লিক করুন  মিশ্রিত করার সময়, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। বরফের উপর রাখুন।
   10× প্রাইমার I	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। বরফের উপর রাখুন।
   10× প্রাইমার II, T50#	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত, তারপর  সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। বরফের উপর রাখুন।
   বর্ধক	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।
   Nuclease- মুক্ত জল	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।

2. লাইব্রেরি সেট আপ করুন Ampথার্মো সাইক্লারে লিফিকেশন প্রোগ্রাম (এলএপি) নিম্নরূপ:
   • 63°C 2 মিনিট
   • 72°C 2 মিনিট
   • 98°C 30 সেকেন্ড
   • [98°C 15 সেকেন্ড, 63°C 20 সেকেন্ড, 72°C 30 সেকেন্ড] x চক্র সংখ্যা
   • 72°C 3 মিনিট
   • 4°C চিরতরে

দ্রষ্টব্য:
ডাউনস্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশন এবং প্রয়োজনীয়তার উপর ভিত্তি করে সাইকেল নম্বর নমনীয়। 13টি চক্র দিয়ে শুরু করার সুপারিশ করুন। হাইব্রিডাইজেশন এবং ক্যাপচারের জন্য একটি ইনপুট হিসাবে উচ্চ চক্র নম্বর আরও TELL-Seq লাইব্রেরি তৈরি করবে, তবে চূড়ান্ত সিকোয়েন্সিং বিশ্লেষণের জন্য উচ্চতর ডুপ্লিকেশন হার। নিম্ন চক্র সংখ্যা ডুপ্লিকেশন হার কমাতে পারে, কিন্তু কম ডিএনএ ইনপুট ক্যাপচার দক্ষতা হ্রাস এবং লাইব্রেরি জটিলতা হ্রাস করতে পারে। উপযুক্ত চক্র নম্বর নির্ধারণ করার সময় আরও বিবেচনার জন্য হাইব্রিডাইজেশন এবং ক্যাপচারের জন্য কোয়ালিফাই এবং কোয়ান্টিফাই লাইব্রেরির শেষ দেখুন।

জিনোম সাইজ	PCR এর জন্য ব্যবহৃত পুঁতির ভলিউম (B)	পিসিআর ভলিউম	সাইকেল নম্বর
বড়	20 মিলি	75 মিলি	12-14

পদ্ধতি

1. 10 সেকেন্ডের জন্য জপমালা পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড করার জন্য ঘূর্ণি পুঁতি। সমাধান নিচে আনতে পালস স্পিন। একটি 20 µL টিপ ব্যবহার করে, সমস্ত পুঁতি সঠিকভাবে পুনরুদ্ধার করা হয়েছে তা নিশ্চিত করতে 5 বার উপরে এবং নীচে পুঁতিগুলিকে পাইপেট করুন। অবিলম্বে একটি নতুন পিসিআর টিউবে সমগ্র গুটিকা দ্রবণ পরিমাণ স্থানান্তর.
2. PCR টিউবটিকে একটি চৌম্বক স্ট্যান্ডে 1 মিনিটের জন্য বা সমাধানটি পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত রাখুন।
3. নলটি ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে থাকাকালীন, 20 µL সুপারন্যাট্যান্টকে বিঘ্নিত না করে পুঁতিটি সরিয়ে ফেলুন। চুম্বক থেকে পিসিআর টিউব সরান।
4. পিসিআর টিউবে নিম্নলিখিত বিকারক যোগ করুন।
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (µL)
   	বড় জিনোম (75 µL)
   Nuclease- মুক্ত জল	16 মিলি
   2× পিসিআর মাস্টার মিক্স	37.5 মিলি
   10× প্রাইমার I	7.5 মিলি
   10× প্রাইমার II, T50#	7.5 মিলি
   বর্ধক সবুজ	4.5 মিলি

5. ঘূর্ণি বা পাইপটিং দ্বারা ভালভাবে মেশান। সমাধান নিচে আনতে পালস স্পিন।
6. থার্মাল সাইক্লারে টিউবটি রাখুন এবং সঠিক সংখ্যক চক্রের সাথে LAP প্রোগ্রামটি চালান (উপরে দেখুন)।
7. পিসিআরের পর ampলিফিকেশন, বায়োঅ্যানালাইজার বা টেপস্টেশনে গুণমান পরীক্ষা করার জন্য 2 μL PCR পণ্য ব্যবহার করুন। নির্দেশের জন্য কোয়ালিফাই এবং কোয়ান্টিফাই লাইব্রেরি বিভাগ দেখুন।

প্রো টিপ: যদি QC চেক দেখায় যে লাইব্রেরির ফলন তুলনামূলকভাবে কম, তাহলে অবশিষ্ট পিসিআর পণ্য সহ টিউবটি থার্মোসাইক্লারে ফিরিয়ে দিন এবং ampক্লিন আপ লাইব্রেরি বিভাগে যাওয়ার আগে আরও এক বা দুটি অতিরিক্ত চক্রের জন্য লাইফ করুন।

দ্রষ্টব্য:
এটি একটি নিরাপদ স্টপিং পয়েন্ট। PCR পণ্য এক মাসের জন্য -25°C থেকে -15°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

লাইব্রেরি পরিষ্কার করুন

ভোগ্য দ্রব্য

• AMPure XP (ব্যবহারকারী)
• আণবিক জীববিজ্ঞানের জন্য ইথানল 200 প্রমাণ (পরম) (ব্যবহারকারী)
• নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল (ব্যবহারকারী)
• 0.2 মিলি পিসিআর টিউব বা স্ট্রিপ টিউব (ব্যবহারকারী)

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:

আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
তাজা 75% (v/v) ইথানল	ঘরের তাপমাত্রা	প্রতি সেকেন্ডে 400 mL প্রয়োজনampলে 1.5 মিলি নিউক্লিজ-মুক্ত জলের সাথে 200 মিলি ইথানল (0.5 প্রমাণ) মেশান। ঘূর্ণি মিশ্রিত এবং ঘরের তাপমাত্রায় রাখা.
AMPure XP	2°C থেকে 8°C	এটিকে কমপক্ষে 20 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় আনুন এবং ব্যবহারের আগে পুঁতিগুলিকে পুনরুদ্ধার করতে জোরালোভাবে ঘূর্ণি করুন।
Nuclease- মুক্ত জল	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।
TE বাফার, pH 8.0	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।

পদ্ধতি

1. সংক্ষেপে সেন্ট্রিফিউজ করুনampপিসিআর টিউব সব সমাধান নিচে আনতে.
2. 1 মিনিট বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে টিউবটি রাখুন।
3. টিউবটি ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে থাকা অবস্থায়, মালাকে বিরক্ত না করে একটি নতুন 0.2 মিলি পিসিআর টিউবে সুপারনাট্যান্ট স্থানান্তর করুন।
4. একটি পাইপেট দিয়ে স্থানান্তরিত সুপারনাট্যান্ট (পিসিআর পণ্য) এর ভলিউম পরিমাপ করুন।
5. PCR পণ্যে নিম্নলিখিত বিকারক যোগ করুন মোট আয়তন 100 μL।
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি ভলিউম
   পিসিআর পণ্য	75 মিলি
   Nuclease- মুক্ত জল	চূড়ান্ত 100 মিলি মোট

6. ঘূর্ণি জোরালোভাবে পুনরায় সাসপেন্ড AMPure XP সমাধান এবং 78 µL যোগ করুন AMPure XP 100 μL পিসিআর পণ্যে।
7. 10 বার উপরে এবং নিচে পাইপিং দ্বারা মিশ্রিত করুন।
8. 5 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় সেঁকুন।
9. 1 মিনিট বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে টিউবটি রাখুন।
10. বিরক্ত না করে সুপারনেট্যান্টকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন AMPure পুঁতি
11. চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে টিউব রাখার সময়, টিউবে 200 μL সদ্য প্রস্তুত 75% ইথানল যোগ করুন। এটি 30 সেকেন্ডের জন্য বসতে দিন।
12. পুঁতিগুলিকে বিরক্ত না করে সুপারনেট্যান্টকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন।
13. 11-12 ধাপগুলি আরও একবার পুনরাবৃত্তি করুন, নলটিকে পুরো সময়ের জন্য চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে রেখে দিন।
14. টিউবটিকে ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে ক্যাপ খুলে রাখুন এবং ইথানলের চিহ্নগুলিকে বাষ্পীভূত করার জন্য টিউবটিকে 1-2 মিনিটের জন্য শুকাতে দিন। পুঁতিগুলি বেশি শুকিয়ে ফেলবেন না।
15. চুম্বকীয় স্ট্যান্ড থেকে টিউবটি সরান এবং পুঁতিতে 20 μL নিউক্লিজ-মুক্ত জল যোগ করুন।
16. পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড করার জন্য পিপেট বা ঘূর্ণি। এটি 5 মিনিটের জন্য বসতে দিন।
17. 1 মিনিটের জন্য বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত নলটি চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে রাখুন।
18. একটি নতুন টিউবে 18 μL সুপারনাট্যান্ট পুনরুদ্ধার করুন। পুঁতি যাতে বিরক্ত না হয় সতর্ক থাকুন।
19. সুপারনাট্যান্টে TELL-Seq™ লাইব্রেরি রয়েছে।

দ্রষ্টব্য:
এটি একটি নিরাপদ স্টপিং পয়েন্ট। পরিশোধিত TELL-Seq লাইব্রেরি -25°C থেকে -15°C তাপমাত্রায় এক মাসের জন্য সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

লক্ষ্য সমৃদ্ধকরণের জন্য লাইব্রেরির যোগ্যতা এবং পরিমাণ নির্ধারণ করুন

ভোগ্য দ্রব্য

• Agilent উচ্চ সংবেদনশীলতা DNA কিট বা TapeStation উচ্চ সংবেদনশীলতা D5000 ScreenTape Assay (ব্যবহারকারী)
• কিউবিট ডিএসডিএনএ এইচএস অ্যাসে কিট (ব্যবহারকারী)
• TE বাফার, pH 8.0 (ব্যবহারকারী)

দ্রষ্টব্য:
ইলুমিনা সিস্টেমের জন্য স্ট্যান্ডার্ড qPCR লাইব্রেরি কোয়ান্টিটেশন অ্যাস TELL-Seq লাইব্রেরির জন্য কাজ করে, কিন্তু এটির প্রয়োজন নেই।

প্রস্তুতি

1. বায়োঅ্যানালাইজার বা টেপস্টেশন এবং কিউবিট দ্বারা প্রয়োজনীয় উপযোগী সামগ্রী প্রস্তুত করুন।

পদ্ধতি

1. এজিলেন্ট হাই সেনসিটিভিটি ডিএনএ কিটের জন্য 1 μL লাইব্রেরি বা টেপস্টেশন হাই সেনসিটিভিটি D2 স্ক্রিনটেপ অ্যাসের জন্য 5000 μL লাইব্রেরি ব্যবহার করুন।
2. থেকে সংরক্ষিত অপরিষ্কার পিসিআর পণ্যটি পরীক্ষা করুন Amplify লাইব্রেরি বিভাগ একই সময়ে। অপরিষ্কার পিসিআর পণ্যে উচ্চ স্তরের প্রাইমার ডাইমার এবং অ্যাডাপ্টার ডাইমার থাকতে পারে। নিম্ন মার্কার সিগন্যালে হস্তক্ষেপ এড়াতে বায়োঅ্যানালাইজার চিপ বা টেপস্টেশন টেপে লোড করার আগে এটির জন্য নিউক্লিজ-মুক্ত জলের সাথে দ্বিগুণ তরল করা প্রয়োজন।
3. একটি ভাল আকারের লাইব্রেরিতে 1000 bp-এর নিচে বেশিরভাগ লাইব্রেরি টুকরো থাকা উচিত (চিত্র 1)।চিত্র 1. একজন প্রাক্তনampলাইব্রেরি প্রো পরিষ্কার করাfile একটি TapeStation উচ্চ সংবেদনশীলতা D5000 স্ক্রীন টেপ অ্যাস থেকে।
4. লাইব্রেরি -25°C থেকে -15°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যায়।
5. একটি 10-গুণ পাতলা TELL-Seq™ লাইব্রেরি তৈরি করুন৷ample: TELL-Seq™ লাইব্রেরির 2 μL 18 μL নিউক্লিজ-মুক্ত জল দিয়ে পাতলা করুন৷ Qubit dsDNA HS Assay Kit-এর সাথে ঘনত্ব পরীক্ষা করতে 4 µL পাতলা লাইব্রেরি ব্যবহার করুন।
6. SureSelectXT HS টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেম প্রক্রিয়ায় যাওয়া প্রতিটি TELL-Seq™ লাইব্রেরির মোট ভর গণনা করতে ঘনত্ব (ng/µL) এবং ভলিউম ব্যবহার করুন। প্রতি সেকেন্ডে 500 ng -1,000 ng TELL-Seq™ লাইব্রেরিample সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য সুপারিশ করা হয়, কিন্তু লাইব্রেরি ইনপুট প্রতি সেকেন্ডে 250 ng হিসাবে কমample সম্ভব যদিও কর্মক্ষমতা নেতিবাচকভাবে প্রভাবিত হতে পারে.
   দ্রষ্টব্য:
   হাইব্রিডাইজেশন এবং ক্যাপচার প্রোটোকলের জন্য ভলিউম সীমাবদ্ধতা রয়েছে। 12 μL হল DNA ইনপুটের জন্য অনুমোদিত সর্বোচ্চ ভলিউম। ডিএনএ লাইব্রেরি ভলিউম এই সীমার মধ্যে পড়ে কিনা তা নিশ্চিত করার জন্য সতর্কতার সাথে বিবেচনা করা উচিত। আদর্শভাবে হাইব্রিডাইজেশন এবং ক্যাপচার প্রতিক্রিয়াতে QC এর পরে সমস্ত উপলব্ধ TELL-Seq লাইব্রেরি উপাদান ব্যবহার করুন।
7. (ঐচ্ছিক) TELL-Seq™ লাইব্রেরিগুলিকে SpeedVac ভ্যাকুয়াম কনসেনট্রেটর ব্যবহার করে কেন্দ্রীভূত করা যেতে পারে৷ যদি একটি SpeedVac কেন্দ্রীভূত লাইব্রেরির জন্য ব্যবহার করা হয়, তাহলে TELL-Seq™ লাইব্রেরি AMPভাল পুনরুদ্ধারের জন্য কমপক্ষে 30 μL নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল দিয়ে XP পুঁতি থেকে ure XP পরিষ্কার করা যেতে পারে। QC-এর পরে, পরিচ্ছন্ন TELL-Seq™ লাইব্রেরি হাইব্রিডাইজেশন এবং ক্যাপচারের জন্য পছন্দসই ভলিউমে কেন্দ্রীভূত হতে পারে।

দ্রষ্টব্য:
TELL-Seq™ লাইব্রেরি তৈরি করে আইডিটি এবং টুইস্ট বায়োসায়েন্সের মতো অন্যান্য টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেম ব্যবহার করা যেতে পারে। DNA ইনপুট হিসাবে TELL-Seq™ লাইব্রেরি ব্যবহার করে নির্দিষ্ট লক্ষ্য সমৃদ্ধকরণ প্রোটোকল অনুসরণ করুন। প্রতিটি প্রোটোকলে বিস্তারিত ব্লকার ছাড়াও TELL-Seq™ TargetSeq ব্লকারের 5ul ব্যবহার করুন।

লক্ষ্য সমৃদ্ধকরণ নিশ্চিত করুন
নিম্নলিখিত প্রোটোকলটি ইলুমিনা পেয়ারড-এন্ড মাল্টিপ্লেক্সড সিকোয়েন্সিং লাইব্রেরি প্রোটোকল (এজিলেন্ট, G9702-90000) এর জন্য হাইব্রিডাইজেশন এবং ক্যাপচার অংশ শিওরসিলেক্ট এক্সটি এইচএস টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেমের একটি পরিবর্তন। পরিবর্তনগুলি Agilent SureSelect XT HS টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেম এবং সমস্ত Exon V8 ক্যাপচার প্রোবের সাথে TELL-Seq™ WGS লাইব্রেরি প্রস্তুতির সামঞ্জস্যের জন্য অনুমতি দেয়। শুধু হাইব্রিডাইজেশন এবং ক্যাপচারের জন্য অ্যাজিলেন্ট রিএজেন্টগুলি 16-প্রতিক্রিয়া বিন্যাসে (এজিলেন্ট পার্ট নম্বর G9916B) আলাদাভাবে কেনা যেতে পারে। অন্যান্য টার্গেট সমৃদ্ধকরণ সিস্টেম ব্যবহার করলে প্রতিটি সিস্টেমের জন্য নির্দিষ্ট প্রোটোকল অনুসরণ করুন এবং TELL-Seq™ লাইব্রেরিগুলিকে DNA ইনপুট হিসাবে প্রতিস্থাপন করুন। প্রতিটি টার্গেট সমৃদ্ধকরণ প্রোটোকলে বিস্তারিত ব্লকার ছাড়াও 5ul TELL-Seq™ টার্গেট ব্লকার প্রয়োজন

Exome ক্যাপচার প্যানেলে TELL-Seq™ লাইব্রেরি হাইব্রিডাইজ করুন

ভোগ্য দ্রব্য

• SureSelect XT HS এবং XT কম ইনপুট ব্লকার মিক্স, 16 Rxn (Agilent, SureSelect XT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট, ILM Hyb মডিউল, বক্স 2 (PCR পোস্ট করুন), নীল)
• SureSelect RNase Block, 16 Rxn (Agilent, SureSelect XT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট ILM Hyb মডিউল, বক্স 2 (PCR পোস্ট করুন), বেগুনি)
• SureSelect Fast Hybridization Buffer, 16 Rxn (Agilent, SureSelect XT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট ILM Hyb মডিউল, বক্স 2 (PCR পোস্ট), বোতল)
• TELL-Seq™ টার্গেট ব্লকার (UST, TELL-Seq™ টার্গেট ব্লকার বক্স, সাদা)
• SSel XT HS এবং XT লো ইনপুট মানব সমস্ত Exon V7 (Agilent, SSel XT HS এবং XT লো ইনপুট মানব সমস্ত Exon V7, লাল)
• নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল (ব্যবহারকারী)
• 0.2 মিলি পিসিআর টিউব বা স্ট্রিপ টিউব (ব্যবহারকারী)
• TELL-Seq™ লাইব্রেরি (ব্যবহারকারী)

ইনপুট পরিমাণ	প্রতিক্রিয়া ভলিউম (mL)
500 -1,000 এনজি	12 মিলি পর্যন্ত

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:
   

   আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
   XT HS এবং XT লো ইনপুট ব্লকার মিক্স নিশ্চিত করুন	-25°C থেকে -15°C	বরফের উপর গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত করা, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ. বরফের উপর রাখুন।
   অবশ্যই RNase ব্লক নির্বাচন করুন	-25°C থেকে -15°C	বরফের উপর গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত, তারপর সেন্ট্রিফিউজ  সংক্ষেপে বরফের উপর রাখুন।
   দ্রুত হাইব্রিডাইজেশন বাফার নিশ্চিত করুন	-25°C থেকে -15°C	গলানো এবং ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন
   TELL-Seq™ এর বিবরণ টার্গেটসেক ব্লকার	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত করা, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ. বরফের উপর রাখুন।
   TELL-Seq™ এর বিবরণ ডিএনএ লাইব্রেরি	-25°C থেকে -15°C	গলিয়ে বরফে রাখুন

   SSel XT HS এবং XT কম ইনপুট মানব সমস্ত Exon V8

   -85°C থেকে -75°C

   বরফের উপর গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত করা, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ. বরফের উপর রাখুন।

2. একটি থার্মো সাইক্লারে হাইব্রিডাইজেশন প্রোগ্রাম (HP) সেট আপ করুন (উত্তপ্ত ঢাকনা চালু সহ) নীচের প্রোগ্রামের সাথে। প্রোগ্রামটি শুরু করুন, তারপরে অবিলম্বে বিরাম বোতাম টিপুন, আপনি প্রতিক্রিয়াগুলি সেট আপ করার সময় উত্তপ্ত ঢাকনাটিকে তাপমাত্রায় পৌঁছানোর অনুমতি দেয়।

সেগমেন্ট নম্বর	সাইকেলের সংখ্যা	তাপমাত্রা	সময়
1	1	95°C	5 মিনিট
2	1	65°C	10 মিনিট
3	1	65°C	1 মিনিট
4	60	65°C 37°C	1 মিনিট 3 সেকেন্ড
5	1	65°C	ধরে রাখুন

পদ্ধতি

1. প্রতিটি প্রস্তুত TELL-Seq™ লাইব্রেরির 500-1000 ng রাখুনampস্ট্রিপ নলকূপে প্রবেশ করুন এবং প্রয়োজনে নিউক্লিজ-মুক্ত জল ব্যবহার করে প্রতিটি কূপের চূড়ান্ত আয়তন 12 μl এ আনুন। আদর্শভাবে মোট করা ampলিফাইড TELL-Seq™ লাইব্রেরি ডিএনএ, 500-1000 এনজি পরিসরের মধ্যে এবং হাইব্রিডাইজেশন প্রতিক্রিয়ার জন্য সমস্ত ব্যবহার করে।
2. প্রতিটি TELL-Seq™ লাইব্রেরিতেampভালভাবে, 5 μl SureSelect XT HS এবং XT লো ইনপুট ব্লকার মিক্স যোগ করুন এবং 5 μl TELL-Seq™ টার্গেট ব্লকার যোগ করুন৷ 5 সেকেন্ডের জন্য উচ্চ গতিতে ঘূর্ণি তারপর কূপ ক্যাপ. তরল নির্গত কোনো বুদবুদ সংগ্রহ করতে স্ট্রিপ টিউবটি সংক্ষিপ্তভাবে ঘোরান।
3. টিউবগুলিকে থার্মাল সাইক্লারে স্থানান্তর করুন এবং HP প্রোগ্রাম সেট আপ পুনরায় শুরু করতে প্লে বোতাম টিপুন৷
   দ্রষ্টব্য:
   থার্মাল সাইক্লারকে অবশ্যই সেগমেন্ট 3 এর সময় বিরতি দিতে হবে (HP দেখুন) হাইব্রিডাইজেশন কূপে অতিরিক্ত রিএজেন্ট যোগ করার অনুমতি দেওয়ার জন্য, যেমনটি ধাপ 6 এ বর্ণিত হয়েছে। ধাপ 1 এবং ধাপ 2। প্রয়োজন হলে, আপনি সেগমেন্ট 4-এ থার্মাল সাইক্লারকে বিরতি দেওয়ার পরে এই প্রস্তুতির ধাপগুলি শেষ করতে পারেন।
4. নিচের সারণী অনুযায়ী SureSelect RNase Block এর 25% সমাধান প্রস্তুত করুন (1 ভলিউম জল সহ RNase ব্লকের 3 ভলিউম রয়েছে)। রানে সংকরকরণ প্রতিক্রিয়ার সংখ্যার জন্য প্রয়োজনীয় পরিমাণ প্রস্তুত করুন, এবং অতিরিক্ত।
   

   বিকারক

   প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (mL)

   1 প্রতিক্রিয়ার জন্য ভলিউম		8টি প্রতিক্রিয়ার ভলিউম (অতিরিক্ত সহ)	24টি প্রতিক্রিয়ার ভলিউম (অতিরিক্ত সহ)
   অবশ্যই RNase ব্লক নির্বাচন করুন	0.5 মিলি	4.5 মিলি	12.5 মিলি
   Nuclease- মুক্ত জল	1.5 মিলি	13.5 মিলি	37.5 মিলি

5. নিম্নলিখিত ক্রমে ক্যাপচার লাইব্রেরি হাইব্রিডাইজেশন মিশ্রণ প্রস্তুত করুন।
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (mL)
   	1 প্রতিক্রিয়ার জন্য ভলিউম	8টি প্রতিক্রিয়ার ভলিউম (অতিরিক্ত সহ)	24টি প্রতিক্রিয়ার ভলিউম (অতিরিক্ত সহ)
   25% RNase ব্লক সমাধান	2 মিলি	18 মিলি	50 মিলি
   SSel XT HS এবং XT কম ইনপুট হিউম্যান অল এক্সন V7	5 মিলি	45 মিলি	125 মিলি
   দ্রুত হাইব্রিডাইজেশন বাফার নিশ্চিত করুন	6 মিলি	54 মিলি	150 মিলি

   ঘরের তাপমাত্রায় তালিকাভুক্ত রিএজেন্টগুলি একত্রিত করুন। 5 সেকেন্ডের জন্য উচ্চ গতিতে ঘূর্ণি করে ভালভাবে মেশান তারপর সংক্ষিপ্তভাবে স্পিন করুন। অবিলম্বে ধাপ 6 এ এগিয়ে যান।

6. একবার থার্মাল সাইক্লার HP এর সেগমেন্ট 3 শুরু করলে (1°C এ 65 মিনিট), পজ বোতাম টিপুন। সাইক্লার বিরাম দিয়ে, এবং DNA + ব্লকার s রাখার সময়ampসাইক্লারে, কক্ষ তাপমাত্রার ক্যাপচার লাইব্রেরি হাইব্রিডাইজেশন মিক্সের 13 μl স্থানান্তর করুন ধাপ 6 থেকে প্রতিটি সেকেন্ডেampভাল. 8 থেকে 10 বার ধীরে ধীরে উপরে এবং নীচে পাইপ দিয়ে ভালভাবে মেশান। হাইব্রিডাইজেশন প্রতিক্রিয়া কূপগুলি এখন প্রায় 35 μl ধারণ করে
7. নিশ্চিত করুন যে সমস্ত কূপ সম্পূর্ণরূপে সিল করা হয়েছে। ঘূর্ণি সংক্ষিপ্তভাবে, তারপর কূপের নীচ থেকে কোনো বুদবুদ অপসারণের জন্য স্ট্রিপ টিউবটি সংক্ষেপে ঘোরান। অবিলম্বে থার্মাল সাইক্লারে স্ট্রিপ টিউবটি ফিরিয়ে দিন।
8. প্রস্তুতকৃত DNA s-এর সংকরকরণের অনুমতি দিতে তাপীয় সাইক্লিং প্রোগ্রাম পুনরায় শুরু করতে প্লে বোতাম টিপুনampক্যাপচার লাইব্রেরিতে যান।

স্ট্রেপ্টাভিডিন-প্রলিপ্ত চৌম্বক জপমালা প্রস্তুত করুন

ভোগ্য দ্রব্য

• Dynabeads MyOne Streptavidin T1 (ব্যবহারকারী)
• শিওর সিলেক্ট বাইন্ডিং বাফার (এজিলেন্ট, সিওর সিলেক্ট এক্সটি এইচএস টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট আইএলএম হাইব মডিউল, বক্স 1 (পিসিআর পোস্ট), সিএপি)

প্রস্তুতি

নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:

আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
Dynabeads MyOne Streptavidin T1	2°C থেকে 8°C	জোরে সেন্ট্রিফিউজ করুন। ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।
অবশ্যই বাইন্ডিং বাফার নির্বাচন করুন,	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।

পদ্ধতি

1. একটি ঘূর্ণি মিক্সারে Dynabeads MyOne Streptavidin T1 চৌম্বকীয় পুঁতিগুলিকে জোরালোভাবে পুনরায় সাসপেন্ড করুন। চৌম্বক পুঁতিগুলি স্টোরেজের সময় স্থায়ী হয়।
2. প্রতিটি হাইব্রিডাইজেশনের জন্যampলে, একটি তাজা পিসিআর প্লেট বা একটি স্ট্রিপ টিউবের কূপে 50 μl পুনরুদ্ধার করা পুঁতি যোগ করুন।
3. 200 μl SureSelect Binding Buffer যোগ করে পুঁতিগুলি ধুয়ে নিন। 20 বার উপরে এবং নীচে পাইপ দিয়ে মিশ্রিত করুন বা 5-10 সেকেন্ডের জন্য উচ্চ গতিতে কূপ এবং ঘূর্ণি ক্যাপ করুন।
4. প্লেট বা স্ট্রিপ টিউবটিকে একটি চৌম্বক বিভাজক ডিভাইসে রাখুন।
5. কমপক্ষে 5 মিনিট অপেক্ষা করুন বা সমাধানটি পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত, তারপরে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং ফেলে দিন।
6. মোট 3টি ধোয়ার জন্য ধাপ 5-3টি আরও দুইবার পুনরাবৃত্তি করুন।
7. শিওর সিলেক্ট বাইন্ডিং বাফারের 200 μl এ পুঁতিগুলি পুনরায় সাসপেন্ড করুন।

স্ট্রেপ্টাভিডিন-কোটেড বিডস ব্যবহার করে হাইব্রিডাইজড ডিএনএ ক্যাপচার করুন

ভোগ্য দ্রব্য

• SureSelect Wash Buffer 1, 16 Rxn (Agilent, SureSelect XT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট ILM Hyb মডিউল, বক্স 1 (PCR পোস্ট করুন), )
• অবশ্যই ধোয়া নির্বাচন করুন Buffer 2, 16 Rxn (Agilent, SureSelect XT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট ILM Hyb মডিউল, বক্স 1 (PCR পোস্ট করুন), )

প্রস্তুতি

নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:

আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
নিশ্চিত করুন ওয়াশ বাফার 1 নির্বাচন করুন,	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।
নিশ্চিত করুন ওয়াশ বাফার 2 নির্বাচন করুন,	ঘরের তাপমাত্রা	200 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 70 μl অ্যালিকোট গরম করুন। ধাপ 4 দেখুন

পদ্ধতি

1. হাইব্রিডাইজেশন ধাপ সম্পূর্ণ হওয়ার পরে এবং থার্মাল সাইক্লারটি 65 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড হোল্ড স্টেপে পৌঁছে, এস স্থানান্তর করুনampঘরের তাপমাত্রায়।
2. অবিলম্বে একটি মাল্টিচ্যানেল পাইপেট ব্যবহার করে 30 μl ধোয়া স্ট্রেপ্টাভিডিন পুঁতিযুক্ত কূপে প্রতিটি সংকরকরণ মিশ্রণের সম্পূর্ণ আয়তন (প্রায় 200 μl) স্থানান্তর করুন। পিপেট আপ এবং ডাউন 5-8 বার মিশ্রিত করুন।
3. একটি 96-ওয়েল প্লেট মিক্সারে ক্যাপচার স্ট্রিপ টিউবটি কক্ষ তাপমাত্রায় 1400 মিনিটের জন্য জোরালোভাবে (1800-30 rpm-এ) বা ঘূর্ণনযন্ত্রে মেশানো। এস নিশ্চিত করুনamples সঠিকভাবে কূপ মধ্যে মিশ্রিত করা হয়.
4. ইনকিউবেশনের পরপরই পরবর্তী ধাপে এগিয়ে যান। ক্যাপচারের জন্য 30-মিনিটের ইনকিউবেশনের সময়, নীচে বর্ণিত হিসাবে 2°C তাপমাত্রায় শিওরসিলেক্ট ওয়াশ বাফার 70 পূর্বে উষ্ণ করুন। একটি তাজা 200- ওয়েল প্লেট বা স্ট্রিপ টিউবের কূপে ওয়াশ বাফার 2-এর 96 μl অ্যালিকোট রাখুন। প্রতিটি DNA s-এর জন্য বাফারের 6 টি কূপ অ্যালিকোটampদৌড়ে লে. কূপগুলিকে ঢেকে রাখুন এবং তারপরে তাপীয় সাইক্লারে ইনকিউবেট করুন, উত্তপ্ত ঢাকনা চালু রেখে, যতক্ষণ না ব্যবহার করা হয় ততক্ষণ 70 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় রাখা হয়
5. ধাপ 30 এ শুরু করা 3-মিনিটের ইনকিউবেশন পিরিয়ড সম্পূর্ণ হলে, s ঘুরিয়ে দিনampলেস সংক্ষেপে তরল সংগ্রহ.
6. পুঁতি সংগ্রহ করতে একটি চৌম্বক বিভাজক স্ট্রিপ টিউব রাখুন। সমাধানটি পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত অপেক্ষা করুন, তারপরে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং বাতিল করুন।
7. SureSelect Wash Buffer 200-এর 1 μl মধ্যে পুঁতিগুলি পুনরায় সাসপেন্ড করুন। পুঁতিগুলি সম্পূর্ণরূপে পুনরায় সাসপেন্ড না হওয়া পর্যন্ত 15-20 বার উপরে এবং নীচে পাইপিং করে মিশ্রিত করুন।
8. স্ট্রিপ টিউবটিকে ম্যাগনেটিক সেপারেটরে রাখুন। সমাধানটি পরিষ্কার হওয়ার জন্য অপেক্ষা করুন (প্রায় 1 মিনিট), তারপরে সুপারনাট্যান্টটি সরান এবং বাতিল করুন।
9. চুম্বকীয় বিভাজক থেকে স্ট্রিপ টিউবগুলি সরান এবং ঘরের তাপমাত্রায় একটি র্যাকে স্থানান্তর করুন। পুঁতিগুলিকে 200 μl 70°C প্রি-ওয়ার্মড ওয়াশ বাফার 2-এ পুঁতিগুলিকে পুনরায় সাসপেন্ড করুন। পুঁতিগুলি সম্পূর্ণরূপে পুনরায় সাসপেন্ড না হওয়া পর্যন্ত 15-20 বার উপরে এবং নীচে পিপেট করুন। কূপগুলিকে তাজা ক্যাপ দিয়ে সিল করুন এবং তারপর 8 সেকেন্ডের জন্য উচ্চ গতিতে ঘূর্ণি করুন। পুঁতির ছোঁয়া ছাড়াই তরল সংগ্রহ করতে প্লেট বা স্ট্রিপ টিউবটি সংক্ষিপ্তভাবে ঘোরান।
10. s incubateampউত্তপ্ত ঢাকনা দিয়ে থার্মাল সাইক্লারে 5°C তাপমাত্রায় 70 মিনিটের জন্য।
11. কক্ষ তাপমাত্রায় চৌম্বক বিভাজক স্ট্রিপ টিউব রাখুন। সমাধানটি পরিষ্কার হওয়ার জন্য 1 মিনিট অপেক্ষা করুন, তারপরে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং বাতিল করুন।
12. মোট 9টি ধোয়ার জন্য ধাপ 11-6টি আরও পাঁচবার পুনরাবৃত্তি করুন।
13. সমস্ত ধোয়ার বাফার সরানো হয়েছে তা যাচাই করার পরে, প্রতিটি s-এ 25 μl নিউক্লিজ-মুক্ত জল যোগ করুনampভাল. পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড করতে 8 বার পিপেট আপ এবং ডাউন করুন। এসamples আগে বরফ সংরক্ষণ করা যেতে পারে ampবন্ধন

Ampক্যাপচারড লাইব্রেরি

ভোগ্য দ্রব্য

• 5× হারকিউলেস II প্রতিক্রিয়া বাফার (এজিলেন্ট, শিওর সিলেক্ট এক্সটি এইচএস টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট, আইএলএম হাইব মডিউল বক্স 2 (পিসিআর পোস্ট), ক্যাপ ক্লিয়ার)
• হারকিউলেস II ফিউশন ডিএনএ পলিমারেজ (এজিলেন্ট, শিওর সিলেক্ট এক্সটি এইচএস টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট, আইএলএম হাইব মডিউল বক্স 2 (পিসিআর পোস্ট), সিএপি রেড)
• 100 mM dNTP মিক্স, (Agilent, SureSelect XT HS টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট, ILM Hyb মডিউল বক্স 2 (PCR পোস্ট), CAP Green)
• শিওর সিলেক্ট পোস্ট-ক্যাপচার প্রাইমার মিক্স (এজিলেন্ট, শিওর সিলেক্ট এক্সটি এইচএস টার্গেট এনরিচমেন্ট কিট, আইএলএম হাইব মডিউল বক্স 2 (পিসিআর পোস্ট), ক্যাপ ক্লিয়ার)

প্রস্তুতি

1. নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:
   

   আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
   5× হারকিউলেজ II প্রতিক্রিয়া বাফার	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি থেকে মিশ্রিত করুন, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন। বরফের উপর রাখুন।
   হারকিউলেজ II ফিউশন ডিএনএ পলিমারেজ	-25°C থেকে -15°C	সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ। বরফের উপর রাখুন।
   100 মিমি ডিএনটিপি মিক্স	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি থেকে  মিশ্রিত করুন, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন। বরফের উপর রাখুন।
   পোস্ট-ক্যাপচার প্রাইমার মিক্স নিশ্চিত করুন	-25°C থেকে -15°C	ঘরের তাপমাত্রায় গলান। ঘূর্ণি মিশ্রিত করা, তারপর সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ. বরফের উপর রাখুন।

2. নিম্নলিখিত হিসাবে একটি থার্মো সাইক্লারে নিম্নলিখিত প্রোগ্রাম সেট আপ করুন:
   • 98°C 2 মিনিট
   • [98°C 30 সেকেন্ড, 63°C 30 সেকেন্ড, 72°C 1 মিনিট] x 9
   • 72°C 5 মিনিট
   • 4°C চিরতরে

পদ্ধতি

1. পিসিআর প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের উপযুক্ত ভলিউম প্রস্তুত করুন। বিক্রিয়ার সংখ্যার উপর ভিত্তি করে পিসিআর টিউবে নিম্নলিখিত বিকারক যোগ করুন।
   

   বিকারক	প্রতিক্রিয়া প্রতি আয়তন (µL)
   	1 প্রতিক্রিয়ার জন্য ভলিউম	8টি প্রতিক্রিয়ার ভলিউম (অতিরিক্ত সহ)	24টি প্রতিক্রিয়ার ভলিউম (অতিরিক্ত সহ)
   Nuclease- মুক্ত জল	12.5 µL	112.5 µL	312.5 µL
   5× হারকিউলেজ II প্রতিক্রিয়া বাফার	10 µL	90 µL	250 µL
   হারকিউলেজ II ফিউশন ডিএনএ পলিমারেজ	1 µL	9 µL	25 µL
   100 মিমি ডিএনটিপি মিক্স	0.5 µL	4.5 µL	12.5 µL
   পোস্ট-ক্যাপচার প্রাইমার মিক্স নিশ্চিত করুন	1 µL	9 µL	25 µL

2. পিসিআর প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের উপযুক্ত ভলিউম প্রস্তুত করুন। বিক্রিয়ার সংখ্যার উপর ভিত্তি করে পিসিআর টিউবে নিম্নলিখিত বিকারক যোগ করুন। সারণী 25-এ প্রস্তুত করা PCR প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের 29 μl প্রতিটি সেকেন্ডে যোগ করুনample ভাল 25 μl পুঁতি-বাউন্ড লক্ষ্য-সমৃদ্ধ DNA (পৃষ্ঠা 26 এ প্রস্তুত এবং বরফের উপর রাখা)।
3. গুটিকা সাসপেনশন সমজাতীয় না হওয়া পর্যন্ত পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলি উপরে এবং নীচে পিপটিং করে ভালভাবে মিশ্রিত করুন। স্প্ল্যাশিং এড়িয়ে চলুনampকূপের দেয়ালে লেস; s ঘূর্ণন নাampএই ধাপে les.
4. থার্মাল সাইক্লারে টিউবটি রাখুন এবং সঠিক সংখ্যক চক্র সহ প্রোগ্রামটি চালান (উপরে দেখুন)।
5. যখন পিসিআর ampলিফিকেশন প্রোগ্রাম সম্পূর্ণ, স্ট্রিপ টিউবটি সংক্ষিপ্তভাবে ঘোরান। ঘরের তাপমাত্রায় ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে প্লেট বা স্ট্রিপ টিউব রেখে স্ট্রেপ্টাভিডিন-কোটেড পুঁতিগুলি সরান। দ্রবণটি পরিষ্কার হওয়ার জন্য 2 মিনিট অপেক্ষা করুন, তারপর একটি স্ট্রিপ টিউবের কূপে প্রতিটি সুপারনাট্যান্ট (প্রায় 50 μl) সরিয়ে দিন।

ক্যাপচার করা লাইব্রেরি পরিষ্কার করুন 

ভোগ্য দ্রব্য

• AMPure XP (ব্যবহারকারী)
• আণবিক জীববিজ্ঞানের জন্য ইথানল 200 প্রমাণ (পরম) (ব্যবহারকারী)
• নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল (ব্যবহারকারী)
• TE বাফার, pH 8.0 (ব্যবহারকারী)
• 0.2 মিলি পিসিআর টিউব বা স্ট্রিপ টিউব (ব্যবহারকারী)

প্রস্তুতি

নিম্নলিখিত ভোগ্য সামগ্রী প্রস্তুত করুন:

আইটেম	স্টোরেজ	নির্দেশ
তাজা 75% (v/v) ইথানল	ঘরের তাপমাত্রা	প্রতি সেকেন্ডে 400 mL প্রয়োজনampলে 1.5 মিলি নিউক্লিজ-মুক্ত জলের সাথে 200 মিলি ইথানল (0.5 প্রমাণ) মেশান। ঘূর্ণি মিশ্রিত এবং ঘরের তাপমাত্রায় রাখা.
AMPure XP	2°C থেকে 8°C	এটিকে কমপক্ষে 20 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় আনুন এবং ব্যবহারের আগে পুঁতিগুলিকে পুনরুদ্ধার করতে জোরালোভাবে ঘূর্ণি করুন।
Nuclease- মুক্ত জল	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।
TE বাফার, pH 8.0	ঘরের তাপমাত্রা	ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।

পদ্ধতি

1. সেন্ট্রিফিউজে দ্রুত ~1 সেকেন্ড স্পিন দিয়ে সমাধানটি নামিয়ে আনুন।
2. ঘূর্ণি জোরালোভাবে পুনরায় সাসপেন্ড AMPure XP সমাধান এবং 50 µL যোগ করুন AMPপ্রতিটি PCR পণ্যে ure XP.
3. 10 বার উপরে এবং নিচে পাইপিং দ্বারা মিশ্রিত করুন।
4. 5 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় সেঁকুন।
5. 1 মিনিট বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে টিউবটি রাখুন।
6. বিরক্ত না করে সুপারনেট্যান্টকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন AMPure পুঁতি
7. চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে টিউব রাখার সময়, টিউবে 200 μL সদ্য প্রস্তুত 75% ইথানল যোগ করুন। এটি 30 সেকেন্ডের জন্য বসতে দিন।
8. পুঁতিগুলিকে বিরক্ত না করে সুপারনেট্যান্টকে অ্যাসপিরেট করুন এবং ফেলে দিন।
9. 7-8 ধাপগুলি আরও একবার পুনরাবৃত্তি করুন, নলটিকে পুরো সময়ের জন্য চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে রেখে দিন।
10. টিউবটিকে ম্যাগনেটিক স্ট্যান্ডে ক্যাপ খোলা রেখে দিন এবং টিউবটিকে 1-2 মিনিটের জন্য শুকাতে দিন যাতে ইথানলের চিহ্নগুলি বাষ্পীভূত হয়। পুঁতিগুলি বেশি শুকিয়ে ফেলবেন না।
11. চুম্বকীয় স্ট্যান্ড থেকে টিউবটি সরান এবং পুঁতির সাথে 25 μL TE বাফার যোগ করুন।
12. পুঁতি পুনরায় সাসপেন্ড করার জন্য পিপেট বা ঘূর্ণি। এটি 5 মিনিটের জন্য বসতে দিন।
13. 1 মিনিট বা সমাধান পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত চুম্বকীয় স্ট্যান্ডে টিউবটি রাখুন।
14. একটি নতুন টিউবে 23 μL সুপারনাট্যান্ট পুনরুদ্ধার করুন। পুঁতি যাতে বিরক্ত না হয় সতর্ক থাকুন।
15. সুপারন্যাট্যান্টে ক্যাপচার করা TELL-Seq™ লাইব্রেরি রয়েছে।

দ্রষ্টব্য:
এটি একটি নিরাপদ স্টপিং পয়েন্ট। ক্যাপচার করা TELL-Seq লাইব্রেরি -25°C থেকে -15°C তাপমাত্রায় ছয় মাসের জন্য সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য ক্যাপচার করা লাইব্রেরিকে যোগ্য এবং পরিমাপ করুন

ভোগ্য দ্রব্য

• Agilent Bioanalyzer উচ্চ সংবেদনশীলতা DNA কিট বা TapeStation উচ্চ সংবেদনশীলতা D5000 ScreenTape Assay (ব্যবহারকারী)
• কিউবিট ডিএসডিএনএ এইচএস অ্যাসে কিট (ব্যবহারকারী)
• TE বাফার, pH 8.0 (ব্যবহারকারী)

প্রস্তুতি

1. বায়োঅ্যানালাইজার বা টেপস্টেশন এবং কিউবিট দ্বারা প্রয়োজনীয় উপযোগী সামগ্রী প্রস্তুত করুন।

পদ্ধতি

1. Agilent Bioanalyzer হাই সেনসিটিভিটি ডিএনএ কিটের জন্য 1 μL লাইব্রেরি বা টেপস্টেশন হাই সেনসিটিভিটি D2 স্ক্রিনটেপ অ্যাসের জন্য 5000 μL লাইব্রেরি ব্যবহার করুন।
2. লাইব্রেরির ঘনত্ব নির্ধারণ করতে, বায়োঅ্যানালাইজার বা টেপস্টেশন বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যারে অঞ্চলটি 150 bp থেকে 1000 bp পর্যন্ত সেট করুন। রেকর্ড এসampএই অঞ্চলের জন্য ঘনত্ব (nM) (চিত্র 2 দেখুন)। লাইব্রেরির আকার নির্ধারণ করতে, অঞ্চলটি 150 bp থেকে 3000 bp পর্যন্ত সেট করুন। রেকর্ড এসampলাইব্রেরির আকার হিসাবে গড় আকার (bp)।
   সতর্কতা
   বায়োঅ্যানালাইজার (বা টেপস্টেশন) থেকে ঘনত্বের রিডিং সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য প্রয়োজনীয় তরলীকরণ বা লাইব্রেরি পুলিং করার জন্য একটি সূচনা পয়েন্ট হিসাবে ব্যবহার করা উচিত। একটি Qubit dsDNA HS অ্যাসে কিট দিয়ে চূড়ান্ত মিশ্রিত সিকোয়েন্সিং লাইব্রেরি বা লাইব্রেরি পুলের ঘনত্ব যাচাই করুন (ধাপ 6 দেখুন)।চিত্র 2. একজন প্রাক্তনampexome ক্যাপচারড লাইব্রেরি প্রোfile একটি টেপ স্টেশন থেকে উচ্চ সংবেদনশীলতা D5000 স্ক্রীন টেপ অ্যাস।
3. লাইব্রেরি অবিলম্বে সিকোয়েন্স করা যেতে পারে বা -25°C থেকে -15°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
4. সিকোয়েন্সিং করার সময়, প্রতিটি ইলুমিনা® সিকোয়েন্সিং সিস্টেমের দ্বারা প্রস্তাবিত ঘনত্বে TE বাফার ব্যবহার করে লাইব্রেরি পাতলা করুন। সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য পাতলা লাইব্রেরি পুল তৈরি করুন যদি একই রানে একাধিক লাইব্রেরি সিকোয়েন্স করা হয়।
5. Qubit dsDNA HS অ্যাসে কিট দিয়ে লাইব্রেরির ঘনত্ব পরিমাপ করুন। ভর ঘনত্বকে মোলার ঘনত্বে (nM) রূপান্তরের জন্য লাইব্রেরির আকার হিসাবে বায়োঅ্যানালাইজার (বা টেপস্টেশন) পরিমাপ থেকে গড় আকারের মান ব্যবহার করুন।

A = ভর ঘনত্ব (ng/µL)
S = লাইব্রেরির আকার (bp)
মোলার ঘনত্ব (nM) = (A*1,000,000)/(S*650)
সিকোয়েন্সিং প্রস্তুতিতে প্রয়োজনীয় ভলিউম সামঞ্জস্য করুন যদি Qubit দ্বারা পরিমাপ করা লাইব্রেরির ঘনত্ব প্রস্তাবিত ঘনত্ব থেকে 10% এর বেশি আলাদা হয়।

দলিল/সম্পদ

ইউনিভার্সাল সিকোয়েন্সিং টেল-সিক টার্গেট সমৃদ্ধকরণ [পিডিএফ] ব্যবহারকারীর নির্দেশিকা TELL-Seq লক্ষ্য সমৃদ্ধকরণ, TELL-Seq, লক্ষ্য সমৃদ্ধকরণ, সমৃদ্ধকরণ

তথ্যসূত্র

• ব্যবহারকারীর ম্যানুয়াল